体外3T3中性红摄取光毒性试验步骤演示

摘要：紫外辐照箱XEPU-1235L是一款模拟太阳光进行光毒性试验的理想设备。紫外辐照箱XEPU-1235L采用UVA灯管，辐照时的UVB能量仅占1%，符合《化学品 体外3T3中性红摄取光毒性试验方法》标准中对光毒性试验光源的要求。在进行光毒性试验时，直接在紫外辐照箱的操作面板上设置照射能量或时间，一键开启照射，轻松完成光毒性试验！

光毒性试验基本原则

光毒性（phototoxicity）是指应用于机体的物质经暴露于光线后诱发或增强的毒性反应，或者全身应用一种物质后由皮肤光照引发的反应。体外3T3中性红摄取光毒性试验可以用于鉴定受试物暴露于光照后由活性化学物质诱导产生的潜在光毒性。本试验通过比较暴露于化学物质的细胞在有光照和无光照条件下细胞活性相对降低的值评价光细胞毒性，由本试验鉴定的物质很可能具有体内光毒性，这种作用或者由于全身应用后分布于皮肤产生，或者经局部应用后产生。

本光毒性试验方法建立的基础是，比较有或无非细胞毒性剂量的刺激性光照射情况下化学品的细胞毒性。细胞毒性是以受试物在光照射处理24小时后与受试物浓度相关的细胞摄取活体染料中性红的还原量来表示的。中性红是一种弱的阳离子染料，极易以非离子扩散的方式穿透细胞膜并在细胞溶酶体内聚集。细胞表面的改变或溶酶体膜敏感性的改本导致溶酶体脆性增高等变化，并逐渐不可逆，这种变化由外来物质的作用引起，导致细胞吸收和连接 NR 的能力下降，这样就有可能区分活的、损伤的或死亡的细胞。这是本光毒性试验的基础。

Balb/c3T3细胞经24小时培养形成单层，每种受试物用两块96孔培养板，将8个不同浓度的受试化学物质预培养1小时。接着将其中一块培养板暴露于无细胞毒性的更高光照剂量下，另一块培养板置于暗处。然后两块培养板都用细胞培养基代替处理培养基再培养24小时，中性红摄取测定细胞活性。以占未处理阴性对照组的百分比表示细胞活性，分别计算每一个试验浓度的值。通过比较有光照和无光照下获得的浓度反应来预测潜在光毒性。

光毒性试验的光源

选择合适的光源是光毒性试验关键的因素。体内光毒性反应通常与UVA（长波紫外线）和可见光相关，而与UVB（中波紫外线）相关性小，但UVB却具有较高的细胞毒性，随着波长从313nm到280nm变化，细胞毒性增加约1000倍。

根据国际照明委员会的紫外线波长分类，315-400nm属于UVA，280-315nm属于UVB，100-280nm属于UVC。

光毒性试验的光源必须符合以下三点：

1. 光源发射的光波长能被受试物吸收（吸收光谱）

2. 光的剂量（在一个合理的暴露时间内能达到的剂量）能满足已知光毒性化学物质的检测

3. 所用的波长和剂量不能有损于试验系统

紫外辐照箱XEPU-1235L是一款模拟太阳光进行光毒性试验的理想设备。紫外辐照箱XEPU-1235L采用UVA灯管，辐照时的UVB能量仅占1%，满足光毒性试验对过滤UVB的要求，贴近真实紫外线照射效果。符合《化学品 体外3T3中性红摄取光毒性试验方法》标准中对光毒性试验光源的要求。

紫外辐照箱XEPU-1235L进行光毒性试验的步骤演示

根据《化学品 体外3T3中性红摄取光毒性试验方法》，剂量为5J/cm²的UVA长波紫外线对Balb/c 3T3细胞无毒性作用，但足以有效地激发化学物质产生光毒性反应。例如在50min内达到5J/cm²剂量，辐照度调到1.7mW/cm²。如果使用另外的细胞系或不同的光源，照射剂量必须校准，以使剂量的选择对细胞无害并足以对标准光学毒性物质产生激发作用。

紫外辐照箱XEPU-1235L专为体外光毒性试验设计，在出厂时预设5J/cm²的辐照剂量，可以一键快速开启照射。实验人员也可以自定义其他照射能量值或时间值，操作简单又灵活。

下方视频展示了，使用紫外辐照箱XEPU-1235L进行光毒性试验的步骤，分别展示了如何设置照射能量和照射时间。

光毒性试验光源介绍：紫外辐照箱XEPU-1235L

了解更多：UV Irradiator

参考：化学品 体外3T3中性红摄取光毒性试验方法.pdf