Hoechst染料的激发发射光谱和应用

Hoechst染料的特性

Hoechst染料是一种用于DNA染色的蓝色荧光核酸染料。Hoechst染料可渗透细胞，具有多种应用，例如自动DNA测定和染色体分选。Hoechst染料是有用的活体染色剂，可用于流式细胞术识别DNA损伤，以及通过监测染料的发射光谱变化进行其他活力测量。Hoechst染料由Hoechst AG开发，该公司对其所有化合物进行了编号，因此染料Hoechst 33342是该公司生产的第33,342个化合物。另外三种相关的Hoechst染料是Hoechst 33258、Hoechst 33342和Hoechst 34580。染料Hoechst 33258 和 Hoechst 33342是常用的染料，它们具有相似的激发和发射光谱。Hoechst 33258的水溶性比Hoechst 33342稍高，但两者均已广泛用于活细胞染色。

Hoechst染料的应用

0.1–12 μg/ml浓度的Hoechst染料通常用于对细菌或真核细胞中的DNA进行染色。细胞在室温或37°C下染色1-30 分钟，然后洗涤以去除未结合的染料。Hoechst 染料通常用作DAPI核酸染料的替代品。

Hoechst染料和DAPI之间的主要区别是：

1. Hoechst染料的毒性低于DAPI，使染色细胞具有更高的活力。

2. 某些Hoechst染料（Hoechst 33342）中额外的乙基使它们更具细胞渗透性。

Hoechst染料通常在以下应用中对基因组DNA进行染色：

1. 荧光显微镜和免疫组织化学（通常与其他荧光团一起使用）Fluorescence microscopy and immunohistochemistry

2. 流式细胞术用于计数或分选细胞（例如，使用Hoechst染料来分析群体中有多少细胞处于细胞周期的哪个阶段）Flow cytometry to count or sort out cells

3. 在琼脂糖凝胶中检测存在RNA的DNA Detecting DNA in the presence of RNA in agarose gels

4. 自动DNA测定 Automated DNA determination

5. 染色体分选 Chromosome sorting

Hoechst的激发光和发射光

Hoechst 33258染料在352nm紫外光激发下发出蓝青色荧光，发射光峰值在461nm附近。

Hoechst 34580染料可以被392nm光激发出荧光，发射光峰值在440nm附近。

Hoechst染料可溶于水和有机溶剂，如二甲基甲酰胺或二甲亚砜。Hoechst染料的荧光强度也会随着溶剂pH值的增加而增加。

下图是Hoechst染料的激发发射光谱。

析浦科学仪器自主研发的GFPfinder-2101UV激发光峰值是365nm紫外光，可以激发Hoechst染料发出荧光。GFPfinder-2101UV配有4颗大功率LED，照射面积大且强度高，照射样本后直接通过肉眼就可以观察荧光。同时提供一副透明的紫外线防护眼镜，既可保护实验人员免受紫外线伤害，又不影响观测荧光。

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