利用绿色荧光蛋白GFP进行转基因植株检测

利用绿色荧光蛋白GFP进行转基因植株检测

绿色荧光蛋白GFP和红色荧光蛋白RFP作为报告分子被广泛地运用在转基因植株检测中。在植物的转基因遗传转化过程中，利用绿色荧光蛋白（GFP, EGFP）或者红色荧光蛋白RFP作为标签蛋白，能够在早期愈伤阶段辅助筛选鉴定阳性转化的愈伤组织，并筛选出有荧光的阳性转化愈伤组织进行后续培养。

作为报告分子，绿色荧光蛋白GFP在植物中主要有2个作用：监测基因的表达和蛋白质的定位。作为转基因植株的报告分子，绿色荧光蛋白GFP的一个显著优点是，在不破环细胞和化学染色的情况下直接成像，检测极为方便。此外，如果转基因植物中有较高水平的GFP转录本时，可直接使用长波365nm紫外灯GFPfinder-2101UV或蓝光手电筒GFPfinder-2101RB进行照射，利用GFP发绿色荧光的现象进行检测。

绿色荧光蛋白GFP荧光检测的缺点就是没有放大作用，它不能像酶一样通过加工无数的底物分子而将信号放大。所以一般都需强启动子以驱动绿色荧光蛋白GFP基因在细胞内足量的表达。

绿色荧光蛋白GFP在转基因中的应用需要满足3个条件:

1. 在植物细胞中，必须要有足够的转录本才能观测到绿色荧光蛋白GFP的荧光现象。

2. 绿色荧光蛋白GFP必须经过合适的转录后修饰才能产生成熟的绿色荧光蛋白GFP。

3. 绿色荧光蛋白GFP需要定位在合适的位置，才能发生转录过程，从而进行适量的积累来便捷地检测表达细胞。

利用绿色荧光蛋白GFP进行转基因植株检测时，需要注意几个方面的问题：

1. 首先，绿色荧光蛋白GFP的表达水平受多种因素的影响。很明显高基因拷贝数和强启动子/增强子有利于转录和翻译。一般都需强启动子以驱动绿色荧光蛋白GFP基因在细胞内足量表达。

2. 其次，不同的植物组织发绿色荧光的情况不同，选择实验操作步骤相同、且同一时期的转基因植株作比较，对于绿色荧光蛋白GFP的检测非常重要。

用于转基因植株荧光检测的GFP手电筒

GFPfinder-2101荧光手电筒是一款便携的荧光蛋白检测光源，可用于激发和检测各种常见的荧光蛋白，如绿色荧光蛋白GFP，红色荧光蛋白RFP和黄色荧光蛋白YFP等。GFPfinder-2101荧光手电筒小巧便携，可在实验室检测，也可带入野外检测，无需采摘叶片。

用GFPfinder-2101照射样本，肉眼可直接观察荧光，实时对阳性和阴性的转基因植株进行筛选。

下图：GFPfinder-2101RB荧光手电筒套装（激发光波长450nm），可用于检测含绿色荧光蛋白GFP的转基因植株

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