GFP和EGFP的区别

GFP绿色荧光蛋白（Green Fluorescent Protein）

GFP是一种在蓝光或紫外光下发出绿光的蛋白质。它天然存在于维多利亚多管发光水母中。GFP由238个氨基酸组成。GFP 的大小为26.9 kDa。GFP因其固有荧光而无需任何辅助分子，是分子生物学中的强大工具。荧光是由于蛋白质的连续氨基酸的共价重排而产生的。 蛋白质折叠后，主链原子 Ser65、Tyr66 和 Gly67 在 O2 存在下形成高度共轭的平面对羟基苯亚甲基咪唑啉酮发色团。 晶体结构研究表明，发色团堆积在分子 β 桶结构的核心内，可防止其因顺磁性氧、水偶极子或顺反异构化而猝灭。 此外，发色团与邻近分子的非共价相互作用增强了其光谱特性。

EGFP是增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein）

EGFP是野生型GFP的变体，具有比GFP更高的发射强度。EGFP是个也是最重要的GFP变体之一。 F64L和S65T这两个突变生成的EGFP在37°C下具有更高的折叠效率。EGFP在490nm处具有单个激发峰，这是由于S65T抑制了395nm峰，因为它调节附近Glu222的电离态。另一方面，F64L提高了37℃下的折叠效率。重要的是，EGFP的密码子序列针对在哺乳动物细胞中的表达进行了优化。

GFP和EGFP的相同和区别之处

GFP和EGFP的相同之处：

1. GFP和EGFP都属于绿色荧光蛋白，激发后都会发出绿色荧光。

2. GFP和EGFP是充当内部发色团的蛋白质（internal chromophores），不需要任何辅助酶/底物、辅因子或基因产物来显示其颜色。因此，两者都被用作分子生物学中基因表达的报告基因。

3. GFP和EGFP与发色团形成经典的β-桶状折叠，包含穿过结构核心的螺旋。

GFP和EGFP的区别：

1. GFP激发光峰值：488nm蓝光或365nm紫外光，EGFP激发光峰值：488nm蓝光。

2. GFP和EGFP激发后都会发出绿色荧光，但是EGFP发出的绿色荧光比GFP更亮。

3. GFP是从水母维多利亚水母中分离出来的野生型蛋白质。但是，EGFP是原始野生型的工程变体。

下图：含GFP的烟草叶片在析浦GFPfinder系列手电筒照射下发出强烈明亮的绿色荧光

下图：析浦GFPfinder-2101RB单波长荧光手电筒，488nm蓝色光源，可用于观察绿色荧光蛋白GFP在动物、植物、微生物、愈伤组织等的荧光表达。标准配置包含一支蓝光荧光手电筒，一副黄色荧光观察眼镜和一个单反相机拍照滤镜。终端用户可免费试用荧光手电筒！

Reference: Arpino, James A. J., et al. “Crystal Structure of Enhanced Green Fluorescent Protein to 1.35 Å Resolution Reveals Alternative Conformations for Glu222.” PLOS Medicine, Public Library of Science, journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0047132.