凝胶电泳实验步骤及原理

凝胶电泳(gel electrophoresis)是什么?

假设你刚刚做了一个PCR反应，复制了许多目标DNA。或者你已经做了一些DNA克隆，试图将基因复制到圆形DNA质粒中。现在，你想检查你的PCR是否有效，或者你的质粒中是否有正确的基因。如何直接观察DNA片段？

凝胶电泳（gel electrophoresis）是一个好选择！凝胶电泳是一种电泳形式，在分子生物学中常用于核酸（DNA/RNA）分子的分离、纯化和鉴定。凝胶电泳是一种用于根据DNA/RNA分子大小和电荷分离DNA/RNA片段的技术。根据分子的大小和电荷，分子将以不同的方向或不同的速度穿过凝胶，从而使它们相互分离。

所有的DNA分子每单位质量都有相同的电荷量。所以，DNA片段的大小决定了它们的移动速度。通过凝胶电泳实验，我们可以直接观察到样本中存在多少不同的DNA片段，以及它们相对于彼此的大小。我们还可以把已知大小的DNA片段当成“标尺”在一旁，来确定一段DNA的大小。

什么是琼脂糖(Agarose)？

用于DNA分离的凝胶通常由一种名为琼脂糖的多糖制成，这种多糖呈干燥的粉末状薄片。

琼脂Agar是从红藻中获得的凝胶状物质，从中进一步纯化得到琼脂糖。琼脂糖不带电荷，具有亲水性，对敏感的生物大分子极少引起变性和吸附，是理想的惰性载体。常在生物化学实验室中，作为电泳、层析等技术中的半固体支持物，用于分子的分离和分析。

琼脂糖在凝胶中的百分比影响了孔隙的大小，从而影响了可能通过的分子的大小以及通过的速度。琼脂糖的百分比越高，孔径越小，因此能够通过的分子越小，通过速度越慢。所以，高浓度琼脂糖用于小分子的分离，低浓度琼脂糖用于大分子的分离。琼脂糖凝胶是根据质量体积比来制备的。1克琼脂糖和100毫升电泳缓冲液可以制备1%的琼脂糖凝胶。（1g agarose/100ml buffer = 1% gel）。在分子生物学实验室中，0.7~1%的琼脂糖凝胶通常用于日常的DNA分离，对0.2~10kb范围内的片段提供清晰的区分。

使用析浦紫外透射台XEPU-1126观察DNA/RNA片段

DNA/RNA片段被分离后，我们就可以检查凝胶上面的条带。由于DNA肉眼不可见，在制备琼脂糖凝胶时，会加入溴化乙锭（Ethidium Bromide）进行DNA染色。溴化乙锭是一种芳香族化合物，能够嵌入DNA的相邻的碱基之间，形成一种络合物。把染色后的凝胶放置在析浦紫外透射台XEPU-1126上，在紫外线照射下时，DNA片段会发出橘黄色的荧光，使我们能够看到凝胶上不同位置的DNA。

凝胶上一条定义明确的DNA“线”被称为带。每条带都包含大量相同大小的DNA片段，这些片段都作为一个群体到达了相同的位置。单个DNA片段（甚至是一小群DNA片段）在凝胶上是看不见的。通过将样本中的条带与DNA ladder进行比较，我们可以确定它们的大致大小。

析浦紫外透射台XEPU-1126

析浦紫外透射台是分子生物学实验中的常用设备，主要用于核酸（DNA/RNA）凝胶电泳实验中的观测和切胶。紫外透射台也可用于测定PCR产物的大小、在限制性内切酶消化后纯化DNA片段、定量DNA或在提取后验证RNA完整性。析浦紫外透射台XEPU-1126是您凝胶电泳实验的好助手！

1. 析浦紫外透射仪XEPU-1126系列可选365nm，302nm或254nm的UV灯管。

2. 均匀透照：优质紫外灯管提供亮度均匀、强度高的紫外光照，即使是微量DNA也可观测到。

3. 光强度可调：10%-99%自由调节。

4. 操作方便：能以任意角度调节紫外防护板，使观测和切胶更方便。

5. 安全设计：透明紫外防护板，可保护实验人员免于紫外线的伤害。

6. 散热设计：内含风扇冷却装置帮助散热。

下图是析浦紫外透射台XEPU-1126

析浦蓝光切胶仪XEPU-1126B

析浦双LED蓝白光透射仪XEPU-1126B，又称蓝光切胶仪、蓝光透射台或蓝白光透射仪。可用于核酸（DNA/RNA）凝胶电泳的观察和切胶，适用于新型无毒DNA染料，避免了溴化乙锭染料对人体的伤害，同时大大降低了紫外线对样本的损伤。一键切换蓝白光源，操作简单，一机多用！是您的切胶好助手！

1. 蓝光LED：适用于荧光染色的核酸和蛋白质凝胶 (fluorescently stained nucleic acid and protein gels)

2. 白色LED：适用于比色染色的蛋白质凝胶和生色染色膜 (colorimetric stained protein gels and chromogenically stained membranes)

下图是析浦蓝光切胶仪XEPU-1126B