紫外交联仪在消除PCR污染中的应用

发布时间：2023-09-18 15:02:46 人气：280 来源：析浦（上海）科学仪器

PCR假阳性

聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction，PCR) 是体外酶促扩增DNA特定片段的常用工具。PCR经常被使用，因为它是检测稀有序列时一个非常灵敏的检测方法。然而，这种灵敏度意味着，即使是一个细胞的DNA污染也会干扰测定结果，产生阳性信号。PCR假阳性源于外源基因组、质粒或PCR产物的污染。这是目前使用PCR作为常规诊断方法的主要限制。

通过紫外交联仪的紫外照射消除PCR污染

实验人员研究了很多消除PCR污染的方法，其中常用的是通过将PCR试剂暴露在紫外线下，灭活污染的DNA，从而提供消除假阳性反应的机会。紫外交联仪作为一台智能可控的紫外辐照设备，是您消除PRC污染的好选择！

紫外照射可以应用于检测人类巨细胞病毒 (CMV) 和人类免疫缺陷病毒 (HIV) 的PCR系统，并被证明可以有效消除实验室遇到的污染以及在UV之前添加到PCR系统中的质粒 DNA（低于100pg）。PCR 系统扩增HIV-1长末端重复 (LTR) 序列的灵敏度不会受紫外辐照的影响。然而，PCR 系统扩增CMV基因组早期基因启动子序列的最终灵敏度降低了1000倍。通过32P标记的放大器的链分离聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，UV照射不会影响PCR产物的大小。因此，只要根据经验确定每个PCR系统对灵敏度的影响，简单的预暴露于紫外光是值得纳入PCR方案的一步。

DNA的紫外线照射会导致嘧啶二聚体的形成，从而阻止它们成为后续PCR中的有效模板。通过析浦紫外交联仪的紫外线照射，可以将聚丙烯微量离心管中的HIV DNA模板减少1000倍以上。引物的灵敏度取决于序列和浓度。具有相邻胸腺嘧啶碱基的寡核苷酸比没有的寡核苷酸更容易受到紫外线的影响。Taq聚合酶对紫外线高度敏感，而脱氧核苷酸三磷酸相对抗紫外线。