RNA与膜的交联方法

交联方法

将RNA固定在膜上有两种常用方法：烘焙或者紫外线交联。传统方法是将膜在80℃的烤箱中烘烤2小时，这种方法的缺点显而易见，耗时长且效率低。于是，更多的生物实验室开始使用紫外交联仪进行RNA的膜交联。相比传统的烘焙法，使用紫外交联仪仅需在254nm紫外光下照射几秒种即可，大大提高了实验效率！

一、传统烘焙法

烘烤的原理是加热膜以除去所有溶解RNA的水。RNA 的一个重要组成部分是其疏水性核苷酸碱基，它与膜上的芳香族基团进行疏水性接触。这种相互作用会受到在80°C烘箱中加热15分钟的影响。

这种传统方法耗时长，效率低。另外，如果不调节热量从而使温度升高至100°C，膜可能会损坏。因此，我们更推荐使用高效便捷智能的紫外交联法。

二、紫外线交联方法

短波紫外线使RNA中的含氮碱基（主要是尿嘧啶）变得高度活跃，并与膜表面的胺基形成共价键。潮湿的膜需要大约0.12J/cm2的紫外线照射量。析浦紫外交联仪XEPU-1208和XEPU-1215系列在出厂时均提供一个默认设置为0.12J/cm2的紫外线剂量，您可以一键使用这个默认值，实现“自动交联”功能。在操作时，注意不要将RNA暴露在紫外线下过少或过度，这两种情况都会降低杂交信号。我们建议，用析浦短波254nm紫外交联仪曝光一分钟，或用析浦中波302nm紫外交联仪曝光三分钟。您可以根据需要，自行设定照射能量或时间。

通过紫外线将RNA快速交联到膜上的实验步骤：

1. 首先，制备具有5个相同泳道的凝胶，每个泳道包含1µg RNA。跑胶并将其转移到膜上。

2. 然后，将膜切成相同的条，每条包含一条泳道。将它们单独包裹在单层塑料膜中。

3. 将析浦紫外交联仪在干净干燥的水平面放置，并插上电源线。

4. 请务必做好紫外防护措施。

5. 打开析浦紫外交联仪的舱门，将条带放进析浦紫外交联仪的辐照室内，关闭舱门。

6. 根据析浦科学仪器为您提供的操作指南，选取对应的操作模式，并在键盘上输入您需要的能量或时间值。

7. 按下开始键，析浦紫外交联仪将启动照射，显示屏开始倒计时。

8. 照射结束时，您会听到蜂鸣提醒，仪器将自动进入待机状态。

9. 打开舱门，取出样品，关闭舱门。

10. 使用完析浦紫外交联仪后，请务必断开电源。

析浦254nm短波8瓦紫外交联仪XEPU-1208：XEPU-1208析浦短波254nm紫外交联仪

析浦254nm短波15瓦紫外交联仪XEPU-1215：XEPU-1215析浦短波254nm紫外交联仪

下图：析浦254nm短波15瓦紫外交联仪XEPU-1215